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广东11选5太坑了吧:膽汁酸在大口黑鱸飼料中的有效性評價試驗總結報告

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瀏覽:- 發布日期:2018-07-19 08:40:03【

澳客广东11选5群 www.nqdmcj.com.cn 試驗機構:中國農業科學院飼料研究所 

簽發人:   齊廣海                 

報告日期:2015年4月28日         

委托單位:山東龍昌動物保健品有限公司

試驗概述表

1

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膽汁酸在大口黑鱸飼料中的有效性評價試驗報告

摘要

本研究依據《飼料原料和飼料添加劑水產靶動物有效性評價試驗指南》對大口黑鱸進行70天有效性評價。受試物為山東龍昌動物保健品有限公司生產的膽汁酸,選擇大口黑鱸(Micropterussalmoides)為靶動物。試驗用大口黑鱸的初始體重為6.17±0.02g,通過在基礎飼料中添加0、80、160、240、300、600 mg/kg的膽汁酸,經過70天飼養試驗,研究其對大口黑鱸的生長性能、血漿脂肪代謝指標、抗氧化能力、腸道消化酶活性及膽酸含量、膽囊膽汁酸含量等的影響,以確定膽汁酸在水產飼料中添加的有效性。試驗結果表明:飼料中添加適量膽汁酸可有效促進攝食和生長性能,但同時增加肝臟總膽汁酸含量。分別以特定生長率、攝食率和肝臟中總膽汁酸含量為指標,通過回歸模型分析獲得大口黑鱸飼料中膽汁酸最適添加量分別為440.5mg/kg、283.3mg/kg和253.8mg/kg。方差分析結果顯示飼料中添加300mg/kg膽汁酸,大口黑鱸獲得最高生長性能,且肝臟膽汁酸含量與D240組沒有差異。在以上添加范圍內,膽汁酸有效降低大口黑鱸肝臟中MDA含量,提高抗氧化能力;通過提高血漿中HDL-C含量顯著促進脂肪代謝,同時有效提高了腸道淀粉酶和脂肪酶活性。綜合生長性能,免疫抗氧化指標及膽汁酸在肝臟中的蓄積水平,建議大口黑鱸飼料中膽汁酸推薦添加量為253.8~283.3mg/kg,最高推薦劑量為300mg/kg。

前言

膽汁酸(Bile acid)分子結構具有兩性,一端為烷基,具有親油性,可以和油脂類結合;另一端為羥基和羧基,具有親水性。兩類性質不同的基團位于環戊烷多氫菲核的兩側,使膽汁酸具有較強的表面活性,能降低油水兩相間的表面張力,促進脂類乳化,擴大脂肪和脂肪酶的接觸面,加速脂類的消化吸收(HillMJ,1995)。膽固醇難溶于水,須摻入卵磷脂-膽汁酸鹽微團中,使膽固醇通過膽道運送到小腸而不致析出。臨床常用鵝脫氧脫酸及熊脫氧膽酸治療膽固醇結石(Podda等,1989)。本試驗以通過在基礎飼料中添加0、80、160、240、300、600mg/kg的膽汁酸,對膽汁酸進行水產靶動物有效性評價試驗,以確定其在水產飼料中添加的有效性。

1、材料與方法

1.1 試驗魚

試驗用水產靶動物為大口黑鱸,購自佛山市三水白金水產種苗有限公司,試驗正式開始前,試驗魚在養殖系統中暫養2周,暫養期間投喂不含外源膽汁酸的基礎飼料。

1.2 受試物

試驗所用膽汁酸由山東龍昌動物保健品有限公司提供,生產批號為20140116,膽汁酸的標示值95%,實測值99.1%。對該產品的相關衛生指標進行了檢測,受試物重金屬含量均符合國家飼料衛生標準,結果見表1。

表1

1.3 試驗飼料

在大口黑鱸的基礎飼料中分別添加0、80、160、240、300、600mg/kg的膽汁酸,制成6種直徑為2.0mm的膨化擠壓浮性顆粒料,自然晾干后備用。6個處理組依次命名為D0、D80、D160、D240、D300、D600。

飼料中的水分、粗蛋白質、粗脂肪、灰分和總能分別采用105℃常壓干燥法、凱氏定氮法、酸水解全脂肪測定法、550℃灼燒法和氧彈儀燃燒法測定。飼料配方及營養成分分析(見表2)。

表2

*膽汁酸在預混料中添加。

*預混料為每千克飼料提供The premix provided the following per kg of diets: VA 20mg, VB1 10mg,VB2 15mg, VB6 15mg,VB12 8mg, VE 400mg, VK3 20mg,VD3 10mg,煙酸胺Niacinaminde 100mg, VC1000mg,肌醇inositol 200mg泛酸鈣Calcium pantothenate 40mg, 生物素biotin 2mg, 葉酸folic acid 10mg, 玉米蛋白粉150mg,硫酸銅CuSO4.5H2O 10mg,硫酸亞鐵FeSO4·H2O 300mg,硫酸鋅ZnSO4·H2O 220mg,硫酸錳MnSO4·H2O 25mg,碘酸鉀3mg,亞硒酸鈉Na2SeO3 5mg,氯化鈷CoCl2·6H2O 5mg,沸石粉Zeolite 332mg,硫酸鎂MgSO4 2000mg。

1.4 分組及試驗管理

試驗在國家水產飼料安全評價基地(北京,南口)室內循環流水養殖系統中進行。隨機挑選體質健康、個體均勻的大口黑驢(平均體重6.17±0.02g),分配到容積為0.26m3的圓錐形養殖桶中。本試驗設計5個處理組,每處理組6個重復,每桶30尾魚。

每天表觀飽食投喂2次,投喂時間分別為8:00,16:00。定期檢測水質,水質條件保持在溶氧DO>7.0mg/L;總氨氮NH4+-N<0.3mg/L;pH=7.5-8.5;水溫25±3℃。

養殖試驗從2014年7月14日到2014年9月21日,共70天。

2、評價指標

2.1生長

試驗期間,記錄每日攝食量,試驗70天后,分別對各桶魚稱重并統計存活率、飼料系數、增重率、特定生長率等。

各指標計算公式:

存活率(Survival rate,SR, %)= 100×終末魚數量/初始魚數量;

相對增重率(Weight gain rate, WGR, %)= 100×(末魚均重-初始魚均重+死魚重)/初始魚均重;

特定生長率(Specific growth rate,SGR%/d) =100×[ln(FBW)-ln(IBW)]/t;其中,IBW為魚體初始均重(g);FBW為終末均重(g);t為實驗天數。

飼料系數(Feed conversion ratio, FCR)=攝食量/(末魚重+死魚重-初始魚重);

攝食率(Feeding rate,,FR% body weight/d)=100×C /(( W0+Wt +Wd)/2)/t,其中W0為魚體初始總重(g);Wt為終末總重(g);Wd為死亡魚體總重(g);C為攝食量(g);t為試驗天數。

2.2 臟器指數

每桶隨機取3尾魚測量體長、體重、內臟重、肝臟重、脾臟重。

各指標計算公式:

肥滿度(Condition factor,CF,g/cm3)=平均體重(g)/[平均體長(cm)]3;

肝體比(Hepatosomatic index, HSI,%)= 100×肝臟重/全魚重。

臟體比(Viscerasomatic index,VSI %)=100×內臟重/體重。

脾臟指數(Spleen index,SSI,%)=100×脾臟重/全魚重。

2.3 血漿脂肪代謝指標及抗氧化指標

每桶隨機取3尾魚,三氯叔丁醇麻醉后尾靜脈取血,加入抗凝劑(2%NaF+4%草酸鉀),用量為30ul/1ml血液。將抗凝血在4℃,4000rmp的條件下離心10min,取上清血漿保存于-80℃的冰箱中待測。檢測指標有:血漿脂肪代謝指標:總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、總膽紅素(TBILI)、高密度脂蛋白(HDL)、堿性磷酸酶(ALP);血漿抗氧化指標:丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽-S轉移酶(GST)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)等。

2.4 肝臟抗氧化指標、淀粉酶、脂肪酶及膽汁酸含量

每桶隨機取2尾魚的肝臟,保存于-80℃的冰箱中。

肝臟組織樣品制備:取組織0.3-0.5g,加入介質勻漿(勻漿介質根據檢測指標確定),組織充分粉碎混勻后,3000rmp,離心10分鐘,取上清液,進行檢測。

2.5 腸道消化酶活性

每桶隨機取2尾魚的中腸和后腸(取中部靠中間1cm長作為中腸,取后一部分靠近肛門處1cm作為后腸),保存于-80℃的冰箱中。

腸道組織樣品制備:取組織0.2-0.5g,加入介質勻漿(膽汁酸勻漿介質為無水乙醇,淀粉酶及脂肪酶勻漿介質為0.7%的生理鹽水),組織充分粉碎混勻后,3000轉/分鐘,離心10分鐘,取上清液,用于檢測淀粉酶、脂肪酶活性。

2.6 膽囊膽汁酸含量

每桶隨機取2尾魚的膽囊的膽汁,保存于-80℃的冰箱中。

膽汁樣品制備:取出膽汁,加入無水乙醇勻漿,充分混勻后,3000rmp,離心10分鐘,取上清液,進行檢測。本試驗所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

3、數據統計

試驗數據以平均數±標準誤(Mean±S. E.)表示,所有數據用SPSS Statistics 17.0軟件進行單因子方差分析(ANOVA),Duncan`s多重比較檢驗差異的顯著性,顯著性水平P<0.05。

4、試驗結果

4.1飼料中添加不同劑量的膽汁酸對大口黑鱸生長性能的影響

在飼料中添加膽汁酸對大口黑鱸生長性能的影響見表3。

表3

各組大口黑鱸存活率均高于96.67%,且各組沒有顯著差異。D300組末均重顯著高于其他組,其WGR和SGR亦達到最高,并顯著高于對照組和D80,D160組。該組攝食率也達到最高水平,并顯著高于對照組(P<0.05)。各組飼料系數沒有顯著差異(P>0.05)。依據特定生長率和攝食率結果進行回歸模型分析,獲得飼料中膽汁酸最適添加量為440.5mg/kg和283.3mg/kg(圖1和圖2)。

圖1

圖2

4.2 飼料中添加不同劑量的膽汁酸對大口黑鱸形體指標的影響

飼料中添加膽汁酸對大口黑鱸形體指標的影響見表4。

表4

肝體比呈現先上升后下降趨勢,D80組肝體比顯著高于D240,D300和D600組,和對照組沒有顯著差異。6個處理組之間的肥滿度、脾臟指數、臟體比均沒有顯著差異(P>0.05)。

4. 3 飼料中添加不同劑量的膽汁酸對大口黑鱸血漿脂肪代謝指標及抗氧化功能的影響

飼料中添加膽汁酸對大口黑鱸血漿脂肪代謝指標的影響見表5。

表5

各個處理組之間TG和ALP沒有顯著差異(P>0.05)。TC和HDL-C隨飼料中膽汁酸的添加水平呈上升趨勢,并在D240組達到最高(P<0.05);TBILI呈現不規律顯著差異(P<0.05),其中D0組與其余各組均差異不顯著(P>0.05)。

飼料中添加膽汁酸對大口黑鱸血漿抗氧化指標的影響見表6。

表6

由表6可以得出,MDA、GST各組均無差異(P>0.05),SOD、T-AOC、GSH-PX呈顯著上升趨勢(P<0.05)。

4.4 飼料中添加不同劑量的膽汁酸對大口黑鱸肝臟組織中抗氧化指標及膽汁酸和膽固醇含量的影響

飼料中添加膽汁酸對大口黑鱸肝臟抗氧化指標及膽汁酸和膽固醇含量的影響見表7。

表7

由表7可得,GSH-PX、T-AOC呈現不規律顯著差異(P<0.05),且D0組與其余各組無顯著性差異。D600組GST最低,并顯著低于D0,D160和D240組(P<0.05)。MDA呈下降趨勢且D300組最低。SOD呈顯著上升趨勢(P<0.05)。肝臟中TC沒有顯著差異,肝臟TBA隨飼料中膽汁酸的添加呈現上升趨勢,并在D240組達到平臺期(P>0.05)。依據折線回歸模型,以大口黑鱸肝臟總膽汁酸含量為指標時,飼料中膽汁酸的最適添加量為253.8mg/kg(圖3)。

圖3

4.5 飼料中添加不同劑量的膽汁酸對大口黑鱸腸道消化酶活性及膽囊膽汁酸含量的影響

表8

由表8可見,大口黑鱸中腸淀粉酶含量顯示不規律上升趨勢,D300組達到最高(P<0.05),中腸脂肪酶顯示不規律性差異(P<0.05)。后腸淀粉酶在D600達到最高,顯著高于其他各組;后腸脂肪酶呈先升后降的趨勢,D80組達到最高,但各組均與對照組沒有顯著差異。各組膽囊膽汁酸含量呈顯著上升趨勢,且最高的D600組膽囊膽汁酸含量約為對照組的4.9倍。

5. 結論

試驗結果表明:澳客广东11选5群中添加適量膽汁酸可有效促進攝食和生長性能,但同時增加肝臟總膽汁酸含量。分別以特定生長率、攝食率和肝臟中總膽汁酸含量為指標,通過回歸模型分析獲得大口黑鱸飼料中膽汁酸最適添加量分別為440.5mg/kg、283.3mg/kg和253.8mg/kg。方差分析結果顯示飼料中添加300mg/kg膽汁酸,大口黑鱸獲得最高生長性能,且肝臟膽汁酸含量與D240組沒有差異。在以上添加范圍內,膽汁酸有效降低大口黑鱸肝臟中MDA含量,提高抗氧化能力;通過提高血漿中HDL-C含量顯著促進脂肪代謝,同時有效提高了腸道淀粉酶和脂肪酶活性。綜合生長性能,免疫抗氧化指標及膽汁酸在肝臟中的蓄積水平,建議大口黑鱸飼料中膽汁酸推薦添加量為253.8~283.3mg/kg,最高推薦劑量為300mg/kg。


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